Результаты микробиологии полости рта

Оценка антибактериальной активности ополаскивателя для полости рта «BlueM» в искусственных условиях: экспериментальное исследование

Автор: Д-р Селин М. Левек

Бакалавр наук, магистр наук, кандидат медицинских наук, доцент

Доцент кафедры микробиологии полости рта, Стоматологический факультет, Университет Торонто

Профессор-исследователь в области генетики микроорганизмов полости рта Почетный доцент, Стоматологический факультет, Университет Гонконга.

Цель: Оценка антиналетного и антибактериального действия ополаскивателя для полости рта «BlueM» против возбудителя кариеса Streptococcus mutans

Методология:

1) Бактериальные культуры и условия роста: В данном исследовании использовались штаммы S. mutans, полученные от детей с активным кариесом. Штаммы S. mutans выводились в бульоне с сердечно-мозговой вытяжкой при температуре 37°С и на воздухе с 5% содержанием CO2.

2) Биопленка выводилась в стерильных микротитрационных пластинах. Рост биопленки начался с введения ночных культур в У свежего бульона с сердечно-мозговой вытяжкой с добавлением глюкозы (20 мМ). Биопленка выдерживалась при температуре 37°С и на воздухе с 5% содержанием CO2 в течение 6 часов (ранняя биопленка), 1 дня (средняя биопленка) или 3 дней (сформировавшаяся биопленка). Для получения сформировавшейся биопленки планктонная фаза была аккуратно удалена через 24 и 48 часов и заменена У свежим бульоном с сердечно-мозговой вытяжкой с добавлением глюкозы.

3) Испытание на минимальную подавляющую концентрацию (МПК) проводилось в соответствии с методом микроразведения в бульоне, с использованием полного бульона с сердечно-мозговой вытяжкой. Жизнеспособность клетки оценивали путем подсчета колониеобразующих единиц (КОЕ) на чашках с агаровой средой.

4) Биопленку промыли стерильным физиологическим раствором для удаления слабосвязанных клеток. Биопленка обрабатывалась 0, 2 мл (10 х МПК) пробной смеси ополаскивателя для полости рта «BlueM» (предоставленной HuberMed, Inc) в течение 60 секунд. В качестве контрольных растворов использовали стерильный физиологический раствор и хлоргексидин. Обработанная биопленка затем промывалась стерильным физиологическим раствором, собиралась методом центрифугирования и перерастворялась в стерильном физиологическом растворе. Клетки последовательно разбавляли и высеивали на чашки с агаровой средой, затем определяли процент жизнестойкости клеток после 60 секунд обработки. Все эксперименты проводились в трех экземплярах из трех независимых бактериальных культур. Значимой считалась p-величина ниже 0, 05.

Результаты проекта:

1. Определение минимального МПК ополаскивателя «BlueM»
2. Клетки S. mutans выводились в ночное время суток в бульоне с сердечномозговой вытяжкой. Клетки разбавляли до той же плотности при 600 нм и сразу использовали для определения МПК. Бульон с сердечно-мозговой вытяжкой использовали в качестве среды, а различные концентрации (0; 0.01; 0.1; 1; 2; 4; 10% (объем/объем)) ополаскивателя «BlueM» протестировали на стерильных 96- луночных титрационных микропланшетах. В качестве контрольного раствора использовали хлоргексидин (0; 0.01; 1; 2; 4; 10 мкг/мл (% массы/объем)). Пластины выдерживались в ночное время суток при температуре 37°С и на воздухе с 5% содержанием CO2. Для определения поглощаемости при 600 нм использовали микропланшетный ридер. МПК был определен как самая низкая концентрация ополаскивателя «BlueM» или хлоргексидина, которая ингибировала видимый рост клеток S. mutans. Все эксперименты проводились из трех независимых культур S. mutans. Полученные результаты показали, что в наших условиях испытания МПК ополаскивателя «BlueM» составлял 1%, в то время как МПК хлоргексидина (контрольный раствор) составлял 10 мкг/мл для возбудителя кариеса S. mutans.
3. Антибиопленочная активность ополаскивателя «BlueM».

Мы провели оценку искусственной восприимчивости возбудителя кариеса S. mutans к ополаскивателю «BlueM». Для имитации кратковременного полоскания полости рта биопленки S. mutans (6-часовая, 1-дневная и 3-дневная) подвергались воздействию в течение 60 секунд. Для уничтожения клеток биопленки рекомендуется концентрация 10 хМПК. Для экспериментов с клетками биопленки мы далее протестировали концентрацию 10% (объем/объем) and 100 мкг/мл (% массы/объем) ополаскивателя «BlueM» и хлоргексидина, соответственно. Воздействие стерильного физиологического раствора на биопленку использовалось в качестве отрицательной контрольной пробы. Результаты представлены ниже на Рисунке 1.

Рисунок 1. Антибиопленочная активность ополаскивателя «BlueM» против возбудителя кариеса S. mutans CHX: хлоргексидин; BlueM: ополаскиватель «BlueM». Для определения количества жизнеспособных клеток биопленки была проведена обработка (в течение 60 секунд) стерильным физиологическим раствором. Процент жизнестойкости клеток определяли сравнением содержания клеток биопленки, обработанной контрольным физиологическим раствором. *, P - величина < 0.05.

Результаты показали, что при концентрации 10% (объем/объем) ополаскиватель «BlueM» эффективно снижал жизнестойкость биопленки S. mutans на 98% (6часовая биопленка), 99.9% (1-дневная биопленка) и 99, 9% (3-дневная биопленка). В то же время обработка хлоргексидином в течение 60 секунд при 10 хМПК не позволила снизить жизнестойкость клеток биопленки (Таблица 1).

Таблица 1. Гибель клеток биопленки

Подводя итоги, следует отметить, что ополаскиватель для полости рта «BlueM» эффективно уничтожает одноклеточный (свободноплавающий) и многоклеточный (биопленка) возбудитель кариеса S. mutans, и его эффективность выше, чем у хлоргексидина.

Довольно интересно то, что «BlueM» особенно эффективно уничтожает более плотную биопленку (3-дневная), которая, как правило, менее восприимчива к обработке противомикробными препаратами, чем более молодая биопленка.

Просмотрено 1204       Нравится 1       Мне нравится