|
|||||
Стоматологическое
|
Бакалавр наук, магистр наук, кандидат медицинских наук, доцент
Доцент кафедры микробиологии полости рта, Стоматологический факультет, Университет Торонто
Профессор-исследователь в области генетики микроорганизмов полости рта Почетный доцент, Стоматологический факультет, Университет Гонконга.
Цель: Оценка антиналетного и антибактериального действия ополаскивателя для полости рта «BlueM» против возбудителя кариеса Streptococcus mutans
1) Бактериальные культуры и условия роста: В данном исследовании использовались штаммы S. mutans, полученные от детей с активным кариесом. Штаммы S. mutans выводились в бульоне с сердечно-мозговой вытяжкой при температуре 37°С и на воздухе с 5% содержанием CO2.
2) Биопленка выводилась в стерильных микротитрационных пластинах. Рост биопленки начался с введения ночных культур в У свежего бульона с сердечно-мозговой вытяжкой с добавлением глюкозы (20 мМ). Биопленка выдерживалась при температуре 37°С и на воздухе с 5% содержанием CO2 в течение 6 часов (ранняя биопленка), 1 дня (средняя биопленка) или 3 дней (сформировавшаяся биопленка). Для получения сформировавшейся биопленки планктонная фаза была аккуратно удалена через 24 и 48 часов и заменена У свежим бульоном с сердечно-мозговой вытяжкой с добавлением глюкозы.
3) Испытание на минимальную подавляющую концентрацию (МПК) проводилось в соответствии с методом микроразведения в бульоне, с использованием полного бульона с сердечно-мозговой вытяжкой. Жизнеспособность клетки оценивали путем подсчета колониеобразующих единиц (КОЕ) на чашках с агаровой средой.
4) Биопленку промыли стерильным физиологическим раствором для удаления слабосвязанных клеток. Биопленка обрабатывалась 0, 2 мл (10 х МПК) пробной смеси ополаскивателя для полости рта «BlueM» (предоставленной HuberMed, Inc) в течение 60 секунд. В качестве контрольных растворов использовали стерильный физиологический раствор и хлоргексидин. Обработанная биопленка затем промывалась стерильным физиологическим раствором, собиралась методом центрифугирования и перерастворялась в стерильном физиологическом растворе. Клетки последовательно разбавляли и высеивали на чашки с агаровой средой, затем определяли процент жизнестойкости клеток после 60 секунд обработки. Все эксперименты проводились в трех экземплярах из трех независимых бактериальных культур. Значимой считалась p-величина ниже 0, 05.
Мы провели оценку искусственной восприимчивости возбудителя кариеса S. mutans к ополаскивателю «BlueM». Для имитации кратковременного полоскания полости рта биопленки S. mutans (6-часовая, 1-дневная и 3-дневная) подвергались воздействию в течение 60 секунд. Для уничтожения клеток биопленки рекомендуется концентрация 10 хМПК. Для экспериментов с клетками биопленки мы далее протестировали концентрацию 10% (объем/объем) and 100 мкг/мл (% массы/объем) ополаскивателя «BlueM» и хлоргексидина, соответственно. Воздействие стерильного физиологического раствора на биопленку использовалось в качестве отрицательной контрольной пробы. Результаты представлены ниже на Рисунке 1.
Рисунок 1. Антибиопленочная активность ополаскивателя «BlueM» против возбудителя кариеса S. mutans CHX: хлоргексидин; BlueM: ополаскиватель «BlueM». Для определения количества жизнеспособных клеток биопленки была проведена обработка (в течение 60 секунд) стерильным физиологическим раствором. Процент жизнестойкости клеток определяли сравнением содержания клеток биопленки, обработанной контрольным физиологическим раствором. *, P - величина < 0.05.
Результаты показали, что при концентрации 10% (объем/объем) ополаскиватель «BlueM» эффективно снижал жизнестойкость биопленки S. mutans на 98% (6часовая биопленка), 99.9% (1-дневная биопленка) и 99, 9% (3-дневная биопленка). В то же время обработка хлоргексидином в течение 60 секунд при 10 хМПК не позволила снизить жизнестойкость клеток биопленки (Таблица 1).
Таблица 1. Гибель клеток биопленки
Биопленка |
Процент гибели клеток биопленки (± станд. отклонение) |
||
Физиологический раствор (контрольный) |
Хлоргексидин |
BlueM |
|
6 часов |
0 |
10:13 (± 11:70) |
97:80 (±0.59) |
1 день |
0 |
38:53 (± 33:37) |
99:94 (± 0.07) |
3 дня |
0 |
20:53 (± 21:29) |
99:96 (± 0.04) |
Подводя итоги, следует отметить, что ополаскиватель для полости рта «BlueM» эффективно уничтожает одноклеточный (свободноплавающий) и многоклеточный (биопленка) возбудитель кариеса S. mutans, и его эффективность выше, чем у хлоргексидина.
Довольно интересно то, что «BlueM» особенно эффективно уничтожает более плотную биопленку (3-дневная), которая, как правило, менее восприимчива к обработке противомикробными препаратами, чем более молодая биопленка.
Просмотрено 1357 Нравится 1 Мне нравится